Дифференциальная диагностика иммунных антител

В большинстве работ для оценки антителообразования авторы пользуются определением титра антител. Однако имеющиеся данные говорят о физико-химической неоднородности антител. Поэтому суммарная их характеристика недостаточна. В зависимости от возрастных особенностей организма и характера иммунизации различают три группы иммунных глобулинов (антител). На ранней стадии иммунизаторного процесса образуются макроглобулиновые антитела (19S), а в дальнейшем ?-глобулиновые (7S). Известно, что 7S антитела обладают большей специфичностью, однако в реакциях агглютинации они значительно менее эффективны и для получения равного уровня реакции необходимо большее количество их, нежели 19S, антител.
Е. В. Чернохвостова (1965) считает, что в настоящее время нельзя характеризовать иммунологические процессы суммарным определением антител.
Для дифференцированного определения антител, различных по физико-химическим свойствам, предложен ряд проб. Наиболее простым и доступным является метод, основанный на избирательном разрушении макроглобулинов редуцирующими веществами, содержащими сульфгидрильные группы (меркаптоэтанол, цистеамин, цистеин, глютатион и др.). 
Deutsch, Morton (1958), Kunkel (1960) установили, что добавление сульфгидрильных соединений ведет к разрыву дисульфидных мостиков и распаду молекулы макроглобулина, ?-глобулиновые же антитела устойчивы к действию этих соединений. Достоверность данной методики подтверждена рядом исследований (Е. В. Чернохвостова, 1965; Fink et al., 1962; Lospalluto et al., 1952; Bauer et al., 1963; Uhr et al., 1963, и др.).
Для дифференцировки иммунных антител, определяемых у женщин, состоящих в бесплодном браке, нами использована методика обработки сыворотки крови цистеином. Для исследования были отобраны 9 женщин, у которых реакция микроагглютинации была резко положительной, и одна женщина с положительной реакцией. В данной группе после предыдущего обследования специфическое лечение не проводилось.
Перед постановкой опыта предварительно была определена необходимая доза цистеина, гарантирующая полную инактивацию макроглобулиновых антител. Работа проводилась со стандартной брюшнотифозной сывороткой. Доказано, что следует употреблять 0,2 м раствора солянокислого цистеина, добавление которого снижало титр 19S антител более чем в 3 раза.
У женщин брали 4—5 мл крови и после центрифугирования отделяли по 1 мл сыворотки. Раствор цистеина готовили непосредственно для опыта; 167 мг вещества растворяли в 5 мл 0,2 м. раствора NaOH. Контроль рН раствора проводили бромтимолсиним индикатором (сине-зеленая окраска). Готовили 20 маленьких пробирок с пробками (10 контроль и 10 опыт), в которые помещали при соответствующей отметке по 0,5 мл сыворотки крови: каждый миллилитр сыворотки обследуемой женщины разливали по 0,5 мл в две пробирки (опыт и контроль). Далее в пробирки с пометкой О (опыт) добавляли по 0,5 мл раствора цистеина, а с пометкой К (контроль) — по 0,5 мл физиологического раствора. Все пробирки герметически закрывали пробками, чтобы не допустить окисления цистеина кислородом воздуха, и в течение 22 часов выдерживали в термостате при температуре 37°.
Реакцию микроагглютинации проводили по методике, описанной ранее. Однако в данном случае определяли титр антител, для чего сыворотку крови в опыте и контроле разводили последовательно в серии пробирок в соотношении: 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128, 1:256, 1:512, 1:512 и 1:1024.
Реакцию микроагглютинации определяли с сыворотками крови при всех разведениях. В случае полной иммобилизации спермиев констатировали, при каком предельном титре антител отмечалось данное состояние, а затем фиксировали титр антител, вызывающий нарушение подвижности семенных нитей. Полученные данные представлены в табл. 28. 
Из таблицы видно, что во всех случаях, когда при предыдущем обследовании реакция микроагглютинации определялась положительной, при последующей ее проверке с обработкой сыворотки крови цистеином проба также была положительной. Если полное прекращение подвижности спермиев в течение первых двух часов в опыте и контроле в среднем определялось при титре 1:16, то явное нарушение подвижности семенных нитей (более чем на 20%) при значительно большем титре антител. С другой стороны, при более высоком титре антител (в среднем 1:256) отмечалась полная иммобилизация семенных нитей в течение первых 2 часов исследования, а при низком (1:32, 1:64) — лишь снижение процента подвижности спермиев.
Можно отметить и такую зависимость: из 10 обследованных женщин, по данным всех проводимых ранее исследований, наличие сенсибилизации к спермиям можно было предположить у 5, и у 5 это состояние было сомнительным. Из табл. 28 видно, что у второй группы женщин (наблюдения 1,5,6,7,10) титр иммунных антител был ниже, чем у первой.
По данным Garsia и Perez (1959), для вызывания бесплодия титр спермаагглютининов в сыворотке крови женщин должен быть не менее 1:100. По мнению авторов, при вливании эякулята во влагалище в норме титр образующихся антител может достигать 1:25, при этом стерильность возникать не должна. По данным В. Ф. Левицкого (1968), у женщин, не имеющих детей, крайне редко удается обнаружить антитела по отношению к спермиям, причем титр их низкий (1:10).
Из табл. 28 следует, что определяемые в сыворотке крови антитела являются, по-видимому, иммунными 7S глобулинами, а не 19S макроглобулинами. Некоторое же снижение в отдельных наблюдениях титра антител происходит в пределах ошибки методики, так как достоверное определение количества макроглобулиновых антител возможно лишь при снижении титра более чем в 2—4 раза. Результаты проведенной работы говорят об отсутствии в сыворотке крови обследуемых женщин 19S антител или же наличие их в титре, более низком, чем ?-глобулиновых антител.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Добавить комментарий
SQL - 47 | 0,104 сек. | 12.51 МБ