Прямой базофильный тест по shelly (1962)

Реакция ставится с неинфекционными аллергенами. Бытовые, эпидермальные, пыльцевые используются в концентрации 1000 PNH в мл, пищевые в разведении с физиологическим раствором 1 :10 от исходной стандартной концентрации, антибиотики — в концентрации 1000 ЕД/мл, ампулированные витаминные препараты в разведении с физиологическим раствором 1:10, новокаин—0.3% раствор, амидопирин — 0,2% раствор, анальгин и сульфаниламиды— 1% раствор, эуфиллин — 0,24% раствор, сернокислая магнезия — 2,5% раствор. В тесте используются лейкоконцентрат, который получают путем центрифугирования при 2000 об/мин в течение 5 минут крови, взятой из вены больного в стерильную пробирку, смоченную гепарином (3 капли гепарина на 5 мл крови). Лейкоцитарный слой серовато-белого цвета, образующийся на границе между плазмой и эритроцитами, набирается пастеровской пипеткой.
Оборудование и реактивы: термостат, центрифуга на 3000 об/мин, микроскоп бинокулярный, гепарин, 0,3% раствор краски «нейтральный красный», вазелин химически чистый, стерильные пастеровские пипетки, пробирки, предметные и покровные стекла.
Приготовление и окраска предметных стекол. Для приготовления 0,3% спиртового раствора краски «нейтральный красный» 300 г красителя смешивается с 100 мл абсолютного спирта. Для лучшего растворения смесь помещается в термостат при 37°С на сутки, периодически помешивается, затем фильтруется через фильтровальную бумагу. Для обезжиривания предметные стекла содержатся в смеси Никифорова (спирт и эфир 1:1). Окраска стекол проводится до реакции: на обезжиренное предметное стекло наносят каплю красителя, высушивают при комнатной температуре. Окрашенные стекла могут храниться в течение нескольких месяцев.
Техника реакции. На предварительно обезжиренное и окрашенное 0,3% спиртовым раствором «нейтрального красного» предметное стекло наносят 0,05 мл лейкоцитарной взвеси больного и 0,05 мл аллергена, перемешивают и покрывают покровным стеклом, края- которого смазаны вазелином; остатки взвеси промокают. Параллельно готовится 2 контрольных мазка: 1-й с аллергеном, к которому у больного нет повышенной чувствительности, 2-й—с тест-контрольной жидкостью, на которой готовится аллерген. Опытный препарат и контрольные помещают в термостат при 37° С на 15 минут; затем под иммерсионной системой микроскопа (при увеличении 600) подсчитывается 40 базофилов в каждом препарате и отмечают среди них количество морфологически измененных и дегранулированных клеток.
Оценка реакции. Тест считается положительным, если процент измененных базофилов в опыте превышает таковой в контроле более чем на 10%. При этом реакция считается слабоположительной, если процент дегранулированных клеток составляет 11 — 15%, умеренно положительной (+ +) — если он превышает контрольный на 16—20% и резко положительной (+ + +) — при дегрануляции базофилов в опыте выше контрольного более чем на 20%. Число дегранулированных клеток в контроле не должно быть более 1—2 (3—5%).

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
SQL - 55 | 0,684 сек. | 12.95 МБ