Реакция торможения миграции лейкоцитов (ртмл) микрометод а г артемовой (1973)

Реакция проводится обычно с бактериальными и лекарственными аллергенами, иногда с пищевыми. В реакции используются гепаринизированная кровь больного и испытуемые аллергены в той же концентрации, которая применяется для кожного тестирования.
Реактивы и оборудование: среда 199, 0,9% раствор хлористого натрия, гепарин, цемент «фосфат», термостат, спиральная центрифуга, микроскоп, часовые стекла, миграционные капилляры Трошанова.
Техника. В стерильную пробирку, смоченную гепарином (1—2 капли), набирают 3—5 мл крови из вены больного и быстро перемешивают. Затем гепаринизированную кровь в объеме по 0,2 мл наносят на два часовых стекла, одно из которых является контрольным. На опытное добавляют 0,05 мл аллергена, а на контрольные—0,05 мл среды 199 или 0,9% раствора хлористого натрия, используемого для разведения аллергена. Смеси перемешивают отдельными стеклянными палочками. В каждую смесь погружают конец пластинки, содержащий 5 прямоугольных микрокапилляров  с поперечным сечением 0,4 X 0,15 мм (миграционные капилляры Трошанова). Концы капилляров замазывают свежеприготовленным цементом «фосфат» (модификации И. П. Замотаева с соавт., 1974) и центрифугируют в спиральной центрифуге УС в течение 5 минут при 2800 об/мин. В результате центрифугирования над слоем эритроцитов образуется слой лейкоцитов. Затем капилляры помечают в термостат при 37° С на 18—20 часов под углом 10°. Исследование опытного и контрольного препаратов проводят под микроскопом при малом увеличении объектива (Х20) с помощью измерительной сетки, вставляемой в окуляр (X 4).
Оценка результатов. Определяется зона миграции лейкоцитов в опытных и контрольном микрокапиллярах. Размер зоны миграции лейкоцитов оценивают по количеству квадратов сетки, полностью заполненных лейкоцитами. Для каждой пробы определяют среднюю величину из показателей 5 контрольных и 5 опытных микрокапилляров с последующим подсчетом индекса торможения миграции лейкоцитов (ИТМЛ) по формуле
      ИТМЛ = [(Пк — По)/Пк] ·100%,
где Пк — средний показатель зоны миграции лейкоцитов 5 контрольных, По —5 опытных микрокапилляров (табл. 5).
Реакция оценивается как отрицательная, если ИТМЛ в опытном капилляре отличается от контрольного менее чем на 30%, слабо положительная ( + ) при различии ИТМЛ на 30—40% и положительная (++), если разница более 50%.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
SQL - 52 | 0,425 сек. | 12.87 МБ